Клещевой риккетсиоз Северной Азии моделировали на мышах линии СЗН массой 16-18 г, которые чувствительны к Rickettsia sibirica. Инфекционный материал получали путем накопления риккетсий в селезенках беспородных белых мышей, предварительно обработанных гидрокортизоном (подкожно 0,2 мл 2,5% суспензии) и зараженных внутрибрюшинно штаммом R.sibirica K1. Одна инфицирующая доза возбудителя, вызывающая 100% гибель зараженных животных, содержалась в 1 мл суспензии, полученной путем растирания одной селезенки в 10 мл фосфатного буфера (рН 7,4).
Инкубационный период экспериментального риккетсиоза мышей линии СЗН составлял 4-6 сут. Максимум гибели животных отмечался на 8-9 сут. Наблюдение за опытными животными проводили в течение 21 сут. Контроль специфичности гибели, а также изучение динамики накопления риккетсий в селезенках инфицированных мышей осуществляли с использованием техники люминесцентной микроскопии мазков-отпечатков, окрашенных специфической флуоресцирующей антисывороткой. Максимум накопления риккетсий в селезенках совпадал с пиком гибели животных.
В работе использовали коммерческие антибиотики: доксициклин (АООТ "Акрихин"), рифампицин (ФАОЗТ "Ферейн"), ломефлоксацин (максаквин фирмы "Searle"), азитромицин (сумамед фирмы "Pliva") и имипенем/циластатин (тиенам фиpмы "Merck Sharp and Dohme"), а также экспериментальные образцы антибиотиков и химиопрепаратов, разработанных Государственным научным центром по антибиотикам: азитромицин, пефлоксацин (порошок и 8% раствор для инъекций), производные рифампицина: рифапентин, азориф. Антибиотики вводили per os в объеме 0,5 мл с помощью шприца с иглой-оливой один раз в сутки, кроме имипенем/циластатина и пефлоксацина для инъекций, которые вводили подкожно. Основными показателями химиотерапевтической эффективности антибиотиков являлись процент защиты (разница выживаемости опытных и контрольных животных в и полнота освобождения организма инфицированных животных от возбудителя (стерилизующий эффект антибиотиков). Для определения стерилизующего эффекта препаратов была применена оригинальная методика воспроизведения рецидива, клещевого риккетсиоза у выживших после инфицирования леченых экспериментальных животных путем введения гидрокортизона [3]. С этой целью в конце срока наблюдения (на 22-23 сут) выжившим опытным животным вводили подкожно 0,2 мл 2,5% суспензии гидрокортизона. Наблюдение за животными продолжалось еще 21 сут. У животных, содержащих жизнеспособные риккетсии, развивался аналогичный первоначальному инфекционный процесс, характеризующийся инкубационным периодом 6-7 сут, с максимальной гибелью животных на 8-12 сут и шлейфом гибели до 20 сут. Эффективность препаратов оценивали в точечных опытах. В каждом опыте использовали не менее 10 животных. Суточные дозы препаратов были эквивалентны терапевтическим дозам для человека. Антибиотики вводили один раз в сут однократно или многократно (до 5 сут) по разным схемам, которые отличались длительностью интервала между моментом заражения и началом превентивного лечения, а также продолжительностью курса химиотерапии (при профилактическом применении - за 1, 3, 7, 10 или 15 сут до инфицирования животных; при экстренной профилактике - непосредственно сразу или через 1 сут после заражения; при этиотропном лечении - на 2 или 3 сут после инфицирования). Статистическую обработку полученных экспериментальных данных проводили по таблицам В.С. Генеса [4]. Результаты и обсуждение Экспериментальные данные, характеризующие химиотерапевтическую активность испытанных антибиотиков при экстренной профилактике экспериментального риккетсиоза (с началом химиотерапии сразу или через 1 сут после заражения), представлены в табл. 1 (при однократном) и в табл. 2 (при многократном) введении препаратов.
Таблица 1. Защитное действие антибиотиков при экстренной профилактике экспериментального клещевого риккетсиоза (однократное применение) Препарат, доза (в мг/мышь)Начало химиотерапии после зараженияВыживаемость мышей при инфицированиипри рецидиве абс.%абс.% Доксициклин 1,0Сразу20/20*100 (83-100)8/2040 (19-64) Чepез 1 cyт16/2080 (56-94)4/1625 (7-52) Рифампицин 2,5Сразу18/2090 (68-99)13/1872 (47-90) Чeрез 1 cyт20/20100 (83-100)14/2070 (46-88) Pифапентин 2,5Сpaзy9/1090 (56-100)6/967 (30-93) Через 1 сут20/20100 (83-100)20/20100 (83-100) Азориф 2,5Сразу20/20100 (83-100)18/2090 (68-99) Через 1 сут20/20100 (83-100)16/2080 (56-94) Ломефлоксацин 1,0Сразу20/20100 (83-100)8/2040 (19-64) Через 1 сут2/1020 (2-56)-- Пефлоксацин (порошок) 2,0Сразу8/2040 (19-64)1/812 (0-53) Через 1 сут0/200 (0-17)-- Пефлоксацин (инъекц. форма) 2,0Сразу18/2090 (68-99)2/1811 (1-35) Через 1 сут0/200 (0-17)-- Азитромицин 2,5Через 1 сут20/20100 (83-100)18/2090 (68-99) Сумамед 2,5Через 1 сут18/2090 (68-99)8/2044 (22-69) Имипенем/циластатин 2,5Сразу10/10100 (69-100)2/1020 (2-56) Через 1 сут0/100 (0-31)--
Из результатов, представленных в таблицах, следует, что при экстренной профилактике клещевого риккетсиоза доксициклин, рифампицин, рифапентин, азориф, азитромицин, сумамед и имипенем/циластатин проявили высокую химиотерапевтическую эффективность как при однократном, так и при многократном их введении (защита от 80 до 100%). В то же время пефлоксацин для перорального введения при однократном введении сразу после инфицирования защищал только 40% экспериментальных животных. Защитный эффект препарата при многократном (в течение 4 сут) его приеме per os практически не повышался (защита 50% животных). Пефлоксацин для инъекций при однократном введении непосредственно после заражения обеспечивал защиту до 90% инфицированных животных. Из фторхинолонов наиболее активным был ломефлоксацин, который надежно (от 90 до 100%) защищал животных как при однократном, так и при многократном его введении сразу или не позже 8 ч после их инфицирования. При введении ломефлоксацина и обеих лекарственных форм пефлоксацина как однократно, так и многократно через 1 сут после заражения защитного эффекта не наблюдали.
Для сравнительной оценки химиотерапевтической активности антибиотиков существенным показателем явилось изучение их стерилизующего эффекта. Выявлено, что интенсивность стерилизующего эффекта зависела не только от вида, но и от схемы применения антибиотика (см. табл. 1 и 2). Наиболее высокая стерилизующая активность отмечена у рифампицина и его производных: рифапентина и азорифа. Выживаемость животных после введения им гидрокортизона составляла от 70 до 100% даже в группах, получавших эти антибиотики однократно. В отличие от рифампицина и его производных доксициклин, защищавший при однократном применении сразу или через 1 сут после заражения до 100% животных, оказывал слабый (от 20 до 40%) стерилизующий эффект. В то же время при 4-5-суточных курсах применения доксициклина гибели животных после введения гидрокортизона не наблюдали. В случае тиенама также отмечено повышение стерилизующего эффекта с увеличением кратности приема антибиотика: после введения гидрокортизона выживало 20% животных при однократном приеме и 70% животных при 5-суточном цикле введения препарата. Достаточно высокой стерилизующей активностью обладал отечественный макролид азитромицин: выживаемость животных после рецидива, вызываемого введением гидрокортизона, составляла 90%. Стерилизующий эффект у сумамеда был несколько ниже - от 30 до 44%. Фторхинолоны не давали высокого стерилизующего эффекта ни при однократном, ни при многократном их применении в оптимальных суточных дозировках. После введения гидрокортизона выживало от 10 до 40% животных, получавших как ломефлоксацин, так и пефлоксацин. При лечебном назначении антибиотиков (на 2-3 сут после инфицирования животных) наиболее высокими (до 100%) защитными свойствами обладали рифампицин и рифапентин, а также доксициклин (80%) (табл. 3). После воспроизведения рецидива клещевого риккетсиоза в этих группах выживало от 62 до 70% мышей. Ломефлоксацин и пефлоксацин при их лечебном применении практически не обладали защитными свойствами. Азитромицин, введенный даже однократно через 2 или 3 сут после инфицирования, обеспечивал выживание около половины (до 60%) экспериментальных животных.
Характерной особенностью рифампицина и его производных азорифа и рифапентина явилась высокая защитная активность при однократном введении за несколько суток до инфицирования животных (табл. 4). Эта способность была более выражена у рифапентина и азорифа. После однократного введения азорифа и рифапентина за 1, 3 и 7 сут до заражения защита животных составляла 100%. При этом стерилизующий эффект профилактического назначения обоих препаратов был высоким (от 90 до 100%). Контролем в этих опытах служил доксициклин, который при однократном введении за 1 и 3 сут до заражения защитным действием практически не обладал (защита от 20 до 40% животных).
Результаты проведенных экспериментов по оценке химиотерапевтичеокой эффективности современных антибиотиков при экспериментальном клещевом риккетсиозе Северной Азии на мышах линии СЗН, позволили расположить испытуемые пpeпapaты в порядке убывания их активности следующим образом: анзамицины (азориф, рифапентин, рифампицин), тетрациклины (доксициклин), макролиды (азитромицин, сумамед), карбапенемы (имипенем/циластатин), фторхинолоны (ломефлоксацин, пефлоксацин для инъекций и для перорального применения). В качестве средств экстренной профилактики и этиотропного лечения клещевого риккетсиоза Северной Азии наиболее активными были антибиотики анзамициновой группы рифампицин и его производные, которые характеризовались высоким защитным действием и стерилизующим эффектом даже при однократном их введении. С точки зрения практической медицины обращает на себя внимание способность этих антибиотиков оказывать длительный (до 7-10 сут) профилактический эффект. Доксициклин уступал рифампицину и его производным по защитным свойствам и стерилизующему эффекту. Внимания заслуживают макролиды азитромицин и сумамед, которые даже при однократном введении обладали выраженной активностью как при профилактическом, так и при лечебном применении, обеспечивая достаточно надежное стерилизующее действие.
Фторхиноловые препараты ломефлоксацин и пефлоксацин характеризовались слабой химиотерапевтической активностью при экспериментальном клещевом риккетсиозе Северной Азии. Их химиотерапевтический эффект наступал при начале курса химиотерапии непосредственно сразу после заражения (пефлоксацин) или не более чем через 8 ч после заражения (ломефлоксацин). Лечебным действием даже при 5-ти суточных курсах химиотерапии испытанные фторхинолоны не обладали. Таким образом, проведенные испытания дают основание рекомендовать в качестве перспективных антибактериальных средств при клещевом риккетсиозе Северной Азии рифампицин и особенно его производные пролонгированного действия азориф и рифапентин, а также доксициклин и азитромицин.
ВНИМАНИЕ! Данные медицинские статьи не могут служить источником информации, необходимой для оказания медицинской помощи, диагностирования заболеваний и лечения пациентов! Вам необходимо пройти консультацию у врачей !!!
и полнота освобождения организма инфицированных животных от возбудителя (стерилизующий эффект антибиотиков). Для определения стерилизующего эффекта препаратов была применена оригинальная методика воспроизведения рецидива, клещевого риккетсиоза у выживших после инфицирования леченых экспериментальных животных путем введения гидрокортизона [3]. С этой целью в конце срока наблюдения (на 22-23 сут) выжившим опытным животным вводили подкожно 0,2 мл 2,5% суспензии гидрокортизона. Наблюдение за животными продолжалось еще 21 сут. У животных, содержащих жизнеспособные риккетсии, развивался аналогичный первоначальному инфекционный процесс, характеризующийся инкубационным периодом 6-7 сут, с максимальной гибелью животных на 8-12 сут и шлейфом гибели до 20 сут. 
